绿茶的色谱指纹谱分类模式初探

    摘  要  以绿茶的数字化色谱指纹谱为基础，探讨用指纹谱来分类绿茶的新模式。各批次绿茶样品间的两两重叠率可作为筛选构建特征指纹谱样品的依据，14个绿茶样品按照特征指纹检出率和总差异率的不同初步划分为3个级别。本法从内在组成上为绿茶的分类提供了一个客观量化的界定标准，有别于过去凭借外形口感的经验评估，可为茶叶乃至自然界其它植物的化学分类提供新的视角。

    关键词  绿茶，色谱指纹谱，化学分类

    1  引言

    茶叶与人类生活密切相关，由于茶多酚类成分的发现，更使得茶叶成为人们所钟爱的纯天然保健饮品。目前，全世界30多个国家都种植有茶树，茶叶的年产量高达250多万吨[1]。然而，茶树引种的情况极为普遍，容易受到土壤、气候等因素的影响发生变异，加之茶叶加工制备方法的不同，致使外观形态和口感都出现了明显的差异，这给茶叶的分类及质量控制带来了相当的难度。现代植物分类学中，茶叶的原植物为被子植物门双子叶植物纲原始花被亚纲山茶目山茶科山茶属植物，但其属下的分类迄今未定[2]。对茶叶的审评检验方法也主要还是主观性很强的目视、口尝，大多依据制备方法、加工模式、产地或季节等的不同划分。若能从茶叶的内在化学组成上作出客观的界定标准，将使茶叶评判更趋客观与公正。

    本研究共收集了23个批次的茶叶样品（其中包括15个绿茶样品、5个乌龙茶样品、2个花茶样品、1个红茶样品），由于乌龙茶和红茶在加工过程中经过了发酵或半发酵处理，花茶在加工过程中加入了其它物质，故以绿茶作为了茶叶指纹谱分类的代表。15个绿茶样品中，云南糯米香普洱茶因制作过程中有赋形剂的添加，故也没有将其作为构建绿茶特征指纹谱的样品。

    2  实验部分

    2.1  仪器与材料

    2695高效液相色谱仪（2996二极管阵列检测器，Waters公司）；Agilent 1100高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；1810D自动双重纯水蒸馏器（上海中生科技有限公司）；HH?S 21型电热恒温水浴锅(江苏省金坛市宏凯仪器厂)。甲醇（HPLC试剂，美国Tedia公司）；二次蒸馏水；98%甲酸（分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司）。表没食子儿茶素（EGC）、(+)?捕?茶素（DC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表儿茶素（EC）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG），以上儿茶素类成分均为Sigma公司产品，纯度均>98%；咖啡因（CAF）由国家麻醉品实验室提供。茶叶样品均购自上海东安路天统茶行，为2002年的明前茶。

    2.2  色谱条件

    仪器：Waters 2695高效液相色谱仪、Waters 2996二极管阵列检测器；色谱柱：Supelco?k Discovery C18 （25 cm×4.6 mm，5 μm）；保护柱：Supelguard?k Discovery C18 （2 cm×4.0 mm，5 μm）；流动相：A相为含0.1%甲酸的甲醇，B相为含0.1%甲酸的水；梯度洗脱程序：12%A18 min19%A25 min27%A13 min32% A9 min35%A5 min12%A。流速：0.5 mL/min；柱温：30℃；数据由Millennium32 Chromatography Manager software处理。

    2.3  样品溶液的制备

    将各批次的茶叶样品适当粉碎，于30℃真空干燥5 h，立即置于干燥器内放冷；精确称取约1 g于250 mL烧杯中，加入200 mL新煮沸的二次蒸馏水，95℃热水浴保温10 min，每隔30 s搅拌1次；温浸结束后冷却至室温，用普通定性滤纸过滤到250 mL容量瓶中，并用少量蒸馏水洗涤烧杯和样品残渣2~3次，合并滤液；在容量瓶中加入0.25 mL的甲酸，再加水定容至刻度，摇匀。各样品液用0.45 μm的微孔滤膜过滤后进样[3,4]。