实验研究:敦煌养颜面脂延缓皮肤衰老的实验研究 延缓皮肤衰老

Time:2013-07-17 08:12:10 来源:1.甘肃中医学院医学美容教研室,甘肃 兰州 730000;2.甘肃省中医药研究院,甘肃 兰州 730000 兰州科技局科研项目(2006-3-3) 作者:王萍,潘文

【摘要】  目的 观察敦煌养颜面脂对老龄大鼠皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。方法 将SPF级雌性SD大鼠随机分成模型对照组、阳性对照组和空白对照组及敦煌养颜面脂高、中、低剂量组。各组大鼠背部脱毛后,给药组涂抹敦煌养颜面脂,模型组涂抹敦煌养颜面脂基质,阳性组涂抹维生素E胶丸。连续涂敷30 d后,以生化分析方法测定皮肤组织中SOD、GSH-PX活性和MDA含量。结果 敦煌养颜面脂高、中、低剂量组中SOD、GSH-PX活性和MDA含量与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);敦煌养颜面脂高、中剂量组与阳性组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且以中剂量组效果最佳。结论 敦煌养颜面脂可显著升高老龄大鼠皮肤中SOD和GSH-PX活性及明显降低MDA含量,具有延缓皮肤衰老的作用。

【关键词】  敦煌养颜面脂;皮肤衰老;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽过氧化物酶;丙二醛;大鼠

Experimental Study on Dunhuang Nourishing Cream in Delaying Skin Aging 

  WANG Ping, PAN Wen

  1.Department of Medical Cosmetology, Gansu College of TCM, Lanzhou 730000, China;2. Gansu Institute of TCM, Lanzhou 730000, China

  Abstract: Objective To observe the influence of Dunhuang Nourishing Cream on the contents of SOD, GSH-PX and MDA in skin of aged rats. Methods Female SD rats of SPF level were divided into 6 groups:high, moderate and low dose groups of Dunhuang Nourishing Cream, model contrasting group, positive contrasting group and blank contrasting group. After removed the hair on the back, the drug groups were applied with Dunhuang Nourishing Cream, the model group was applied with the matrix of Dunhuang Nourishing Cream and the positive group was applied with vitamin E. After 30 days, the contents of SOD, GSH-PX and MDA in the skin were tested with the method of biochemistry analysis. Results Compared with the model group, the contents of SOD, GSH-PX and MDA in the high, moderate and low dose groups had significant difference (P<0.01). Compared with positive group, the high and moderate dose groups had no obvious difference (P<0.05), and the moderate dose group had better effect. Conclusion Dunhuang Nourishing Cream can increase the contents of SOD and GSH-PX in skin and decrease the content of MDA, so that it can delay aging process.

  Key words:Dunhuang Nourishing Cream;skin aging process;SOD;GSH-PX;MDA;rat
 
    敦煌养颜面脂是在开发敦煌医学古方基础上,结合现代生物科技重新设计,筛选出的适合临床应用、疗效确切的外用型中药制剂。主要含有葳蕤仁、土瓜根、零陵香等,对面部皮肤干燥、粗糙皱纹、晦黯无光泽等有较好的治疗和美容作用[1],经临床应用疗效显著。笔者通过实验研究,进一步探讨其作用机理。

  1  实验材料

  1.1  药物与试剂

    敦煌养颜面脂(乳白色霜剂)、敦煌养颜面脂基质(白色乳状稠液),均由甘肃中医学院医学美容教研室提供;维生素E胶丸,青岛双鲸药业有限公司,批号070509,规格:50 mg/粒;超氧化物歧化酶(SOD,批号20070723)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX,批号20070725)、丙二醛(MDA,批号20070724)试剂盒, 均购自南京建成生物工程研究所;科玛脱毛膏,柏维诗(香港)化妆品贸易公司监制,特殊许可证:卫妆特字(2006)第0620号,批号FA12693。

  1.2  动物

    18月龄SPF级雌性SD老龄大鼠50只,体重(470±20)g;4月龄SPF级雌性SD青龄大鼠10只,体重(215±20)g,甘肃中医学院科研实验中心提供,动物质量合格证号:SCXK(甘) 2004-0006。实验室温度:(25±1)℃,相对湿度:70%。

  1.3  仪器

    紫外分光光度计,日本岛津,型号:UV-2401PC;电子精密天平,长沙湘平科技发展有限公司,型号:ES-1000E。

  2  实验方法

  2.1  分组

    取自然衰老老龄大鼠50只,按体重随机分为模型对照组(敦煌养颜面脂基质)、阳性对照组(维生素E)及敦煌养颜面脂高、中、低剂量组,共5组,每组10只;另取青龄大鼠10只,作为空白对照组。然后按分组编号,将所有动物分笼饲养。

  2.2  脱毛

    于实验前24 h将所有动物脊柱两侧及靠臀部皮肤用科玛脱毛膏脱毛,然后用清水将脱毛膏残留物洗净,暴露约3 cm×3 cm范围的皮肤,脱毛后大鼠皮肤光洁正常。之后每3~4 d脱毛1次,以免影响敷药效果。

  2.3  给药
  
  敦煌养颜面脂高剂量组:按0.08 g/100 g体重涂抹;敦煌养颜面脂中剂量组:按0.04 g/100 g体重涂抹;敦煌养颜面脂低剂量组:按0.02 g/100 g体重涂抹;模型对照组:按给药高剂量组的剂量计算涂抹敦煌养颜面脂基质;阳性对照组:涂抹维生素E胶丸100 mg。涂抹方法:先取称好的受试药物少许在脱毛后受试皮肤处按摩1~2 min,然后将剩余药物均匀涂抹、轻拍至吸收。每日1次,连续30 d。给药期间,各组每周称重1次,按体重的变化重新计算涂抹剂量。空白对照组只进行相同方法的脱毛,但不给予任何处理因素,在同等环境下饲养,记录体重变化。

  2.4  10%皮肤组织匀浆制备
   
  各组大鼠均于30 d后断颈处死,取其臀背部脱毛受试皮肤组织块各0.5 g,经预冷生理盐水漂洗,除去皮下脂肪和其他结缔组织,滤纸拭干,称重并放入烧杯中,量筒量取该组织块9倍重量的预冷生理盐水,取2/3量倒入装有组织块的烧杯中,用眼科小剪剪碎组织块后倒入匀浆管中,再用剩余1/3的生理盐水冲洗烧杯壁,用研磨式匀浆器制成10%的组织匀浆(制作过程在冰水中进行),然后反复冻融3次,使细胞完全破碎,内容物全部游离在液相中,进行生化指标检测。

  2.5  生化分析

    SOD与GSH-PX活性及MDA含量,严格参照南京建成生物工程研究所SOD、GSH-PX及MDA试剂盒的说明书方法进行测定。

  3  统计学方法
   
  所有实验数据均采用SPSS11.5统计软件进行分析,各组实验参数以x±s表示。行方差分析,以P<0.05和P<0.01表示有统计学意义。

  4  结果

  (见表1)表1  敦煌养颜面脂对老龄大鼠皮肤中SOD、GSH-PX活性及MDA含量的影响(略)注:与模型对照组比较,△P<0.01

  5 讨论

    皮肤衰老是一个复杂的生理学现象,现已明确是内源性因素与外源性因素共同作用的结果[2]。关于皮肤衰老有很多学说,目前普遍认为,自由基累积损伤是导致皮肤衰老的重要原因[3]。随机体的衰老,体内抗氧化酶类减少,防护功能减退,生物体内自由基堆积,而自由基具有极强的氧化能力,可攻击生物膜中不饱和脂类发生过氧化,形成脂质过氧化物,其终产物MDA是强的交联剂,易与蛋白质、核酸或脂类结合成难溶性物质,从而导致生物膜硬化、细胞破裂死亡等,造成一系列氧化性损伤,而GSH-PX及SOD等则是体内有效的抗氧化剂和自由基清除剂。

    中医理论认为,正气亏虚是皮肤衰老过程的主要因素,若五脏虚损、气血失调,则面色枯槁晦黯、皮肤粗糙、皱纹增多、体弱多病等。所以,中药美容的基本原理是利用药物本身的四气五味、升降沉浮、归经、色泽等特点进行美容保健和养颜抗衰,以辛温药物使用频率较高,如辛夷、葳蕤仁、麝香、桃仁等,具有升腾阳气、鼓舞气血上升于面之作用,从而使面部肌肤获得充足的养分,表现出红润光泽、富有弹性,达到养颜抗衰的目的[4]。敦煌养颜面脂正是根据这一传统美容保健原理,结合现代药理研究研制而成的中药养颜抗衰制剂。本实验结果表明,外用敦煌养颜面脂可显著提高老龄大鼠皮肤中SOD与GSH-PX酶的活性,同时能明显降低老龄大鼠皮肤中MDA含量,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。说明敦煌养颜面脂能有效提高机体抗氧化酶的活性,从而提高了皮肤组织清除自由基与抗氧化的能力,同时也降低了MDA对细胞组织的氧化性损伤,这对改善衰老皮肤细胞功能活性、提高皮肤防护能力、延缓皮肤衰老具有积极的意义。

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