实验研究:养颜祛斑颗粒抗D-半乳糖所致小鼠皮肤衰老作用 d-半乳糖致衰老

Time:2013-07-17 09:14:08 来源:甘肃中医学院,甘肃 兰州 730000;基金项目:甘肃省教育厅科学研究基金(GS999-05) 作者:王倩 高慧琴

【摘要】  :目的 探讨内服养颜祛斑颗粒抗皮肤衰老作用及机制。方法 昆明种雌性小鼠每日背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/(kg·d)造成小鼠衰老模型,同时按高、中、低剂量(6.68、3.34、1.67 g/kg)分别灌服养颜祛斑颗粒,42 d后测定小鼠背部皮肤组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及血清中雌二醇(E2)的含量,并考察对小鼠子宫、卵巢、皮肤干重、湿重及水摄取量的影响。结果 与衰老模型组比较,养颜祛斑颗粒给药组小鼠皮肤中GSH-Px活力及E2含量明显升高,尤以中剂量为最佳(P<0.05,P<0.01),而对小鼠子宫、卵巢、皮肤干重、湿重及水摄取量有增加趋势。结论 养颜祛斑颗粒对D-半乳糖所致衰老小鼠皮肤有明显的抗衰老作用。

【关键词】  养颜祛斑颗粒 皮肤衰老 D-半乳糖 小鼠

  Experimental Study of Anti-aging Effect of Yangyan Quban Particles on Aging Model Mice’s Skin Caused by D-galactose
 
  WANG Qian, GAO Hui-qin

  Gansu College of TCM, Lanzhou 730000, China

  Abstract:Objective To investigate the mechanism of anti-aging effect of Yangyan Quban particles on the aging skin. Methods With the dose of D-galactose 1 000 mg/(kg·d) by sc administration to the female mice for 42 days, the aging model was established. The mice received Yangyan Quban particles (6.68, 3.34, 1.67 g/kg) by ig administration at the same time of injecting D-galactose. Forty-two days later, the dorsal skin samples were collected to determine glutathione peroxidase (GSH-Px) activity and serum estradiol (E2) contents, and the influence on uterus, ovary, skin dry and wet weight and the amount of water intake were studied. Results Compared with the aged model mice, the GSH-Px activity and E2 contents in the mice treated with Yangyan Quban particles were increased remarkably, especially the medium is the best dose (P<0.05, P<0.01), while the uterus, ovary, skin dry and wet weight and intake of water had the increase tendency. Conclusion Yangyan Quban particles has obvious anti-aging effects on aging mice’s skin.

  Key words:Yangyan Quban particles;skin aging;D-galactose;mice

  养颜祛斑颗粒是采用西部道地药材制成的纯中药制剂,临床用于治疗黄褐斑、雀斑等色素沉着性疾病疗效确切,大部分患者使用后还有面部皱纹减少、皮肤白润光泽、弹性增加的效果。为探讨养颜祛斑颗粒延缓皮肤衰老的作用机理,本实验在D-半乳糖所致小鼠衰老模型基础上,观察了其对皮肤衰老的影响。现报道如下。

  1  实验材料

  1.1  动物

     选用3月龄昆明种雌性小鼠100只,体重(30±2)g,兰州生物制品研究所提供(动物合格证号:医动字第14-001号),标准饲料饲养。

  1.2  药物与试剂
   
  养颜祛斑颗粒(由女贞子、当归等组成),甘肃中医学院中药教研室提供;维生素E(上海东海制药厂,批号070103);D-半乳糖(上海伯奥生物科技有限公司,批号070110);硫化钠(莱阳市双双化工有限公司,批号051227);谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒和考马斯亮蓝蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所);雌二醇(E2)试剂盒(北京科美东雅生物科技有限公司)。

  1.3  仪器

  VIS-7220可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司生产);64-1电动离心沉淀器(江苏省响水县医疗器械厂生产);XK96-A快速混匀器;H.H.S21-4恒温水浴锅(上海医疗器械五厂生产);WG2003 SBC台式干燥箱(中外合资重庆四达实验仪器有限公司生产)。

  2  实验方法

  2.1  分组、造模及给药
   
  将动物称重,随机分为6组,每组15只。正常对照组、模型空白组按成人用量折算[1],每日颈背部皮下注射等容量生理盐水(0.1 mL/10 g);治疗组分别灌胃养颜祛斑颗粒,为临床用量的10、20、40倍,即高(6.68 g/kg)、中(3.34 g/kg)、低(1.67 g/kg)3个剂量组;阳性对照组灌胃维生素E 0.05 g/kg。除正常对照组外,各组每日颈背部皮下注射10% D-半乳糖0.1 mL/10 g,给药标示量为1 000 mg/(kg·d)[2]。各组每日灌胃给药1次,连续42 d,注射按无菌操作进行。

  2.2  样本处理

     在灌胃的第42天,用拔眼球方式直接取血(不麻醉),立即放入试管中,离心,分离出血清。再用10%硫化钠脱去小鼠背部的毛,面积为2 cm×3 cm。将动物拉颈处死,迅速剪取背部脱毛处的全层皮肤适量(不含皮下脂肪),待测。

  2.3  皮肤组织匀浆制备

     每只小鼠取皮肤组织块0.5 g左右,经预冷生理盐水漂洗,除去皮下脂肪和其它结缔组织,用滤纸拭干,精密称重,放入平皿内。用量筒取该组织块9倍量预冷的生理盐水,用移液器取2/3量的生理盐水于平皿中,用眼科小剪尽快剪碎组织块。将剪碎的组织块倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3生理盐水冲洗,一起倒入匀浆管中,用匀浆器制成10%皮肤组织匀浆(在冰水中进行),使其完全破碎,细胞内容物完全游离在液相中。将匀浆以3 000 r/min离心15 min,取适量上清液备用。

  2.4  指标测定

     小鼠皮肤组织中GSH-Px采用化学比色法测定,小鼠血清中E2采用放射免疫法测定,均严格按试剂盒说明书方法步骤进行。

  2.5  对衰老雌性小鼠卵巢和子宫重量及水摄取量的影响

     于给药42 d后处死动物,剖取子宫、卵巢,以分析天平精密称其湿重,随即将其放置烘箱中,于80 ℃烘干24 h,称其干重,并计算子宫、卵巢水摄取增加百分率。

  2.6  对皮肤组织含水量的影响

     取小鼠背部皮肤,去毛清洁后,精密称其湿重,随即将其放入烘箱中,于80 ℃烘干12 h,称其干重,计算皮肤含水百分率。

  2.7  统计学方法
   
  所有数据通过SPSS11.5软件进行处理,各组测定指标均用—x±s表示,组间比较采用t检验。

  3  结果

  (见表1~表5)表1  养颜祛斑颗粒对小鼠皮肤组织GSH-Px活力的影响(略)注:与模型空白组比较,*P<0.05,**P<0.01(下同)表2  养颜祛斑颗粒对小鼠血清E2水平的影响(略)表3  养颜祛斑颗粒对衰老雌性小鼠子宫湿重、干重及水摄取量的影响(略)表4  养颜祛斑颗粒对衰老雌性小鼠卵巢湿重、干重及水摄取量的影响(略)表5  养颜祛斑颗粒对衰老小鼠皮肤组织含水量的影响(略)

  4  讨论
   
  D-半乳糖所致小鼠衰老模型是根据衰老的代谢紊乱学说研制的衰老模型,可导致肝、脑、心等内脏器官衰老。本实验通过检测小鼠皮肤某些生化和雌激素含量等抗衰老指标,证实该模型亦可导致小鼠皮肤的明显衰老。正常情况下,机体内自由基的产生与消除处于动态平衡,体内自由基防御酶如GSH-Px可以促进H2O2与还原型谷胱甘肽反应生成H2O及氧化型谷胱甘肽,以阻断脂质过氧化连锁反应,对保护细胞代谢起到重要作用。GSH-Px活性高低可间接反映机体清除氧自由基的能力,从这个意义上讲,能提高抗氧化酶活性的药物即具有抗衰老作用。
   
  女性更年期卵巢功能减退而雌激素不足,发生表皮变薄和皮下脂肪萎缩及弹性消失等一系列变化,有必要探讨性激素对皮肤的作用。下丘脑-垂体-卵巢系统维持着内分泌的动态平衡,其功能减退是女性衰老的一个重要环节。有研究者曾报道卵巢重量随老化而减轻,组织学检查为老化性萎缩;子宫重量也随年龄增大而减轻[3]。女性皮肤是雌性激素的重要靶器官之一。切除卵巢后可见皮肤微血管萎缩,皮肤变薄,弹性消失及出现皱纹等,应用雌激素能增强表皮细胞有丝分裂速率和透明脂酸的合成,刺激胶原的合成、成熟和更替,减少色素沉着,使皮肤的多种退行性病变得以改善。本实验证实,养颜祛斑颗粒可以显著提高雌性小鼠血清雌激素水平,增加小鼠子宫和卵巢的重量,提示养颜祛斑颗粒促进性腺机能是其抗皮肤老化的机制之一。

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